蛋白质的分离纯化根据蛋白质带电性质进行分离，是生物学研究中的重要步骤。在不同pH环境中，蛋白质的带电性质和电荷数量会有所不同，这使得我们可以通过电泳法将它们分离。在电泳法中，各种蛋白质在相同的pH条件下，由于分子量和电荷数量的不同，在电场中的迁移率也不同，从而得以分开。

等电聚焦电泳是一种特别注重蛋白质带电性质的分离方法。它利用一种两性电解质作为载体，在电泳过程中形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度。当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，它们会到达各自等电点的pH位置并停止。这种方法不仅可用于分析蛋白质，还能进行蛋白质的制备。

离子交换层析法是另一种利用蛋白质带电性质进行分离的方法。这种层析法使用阳离子交换剂（如羧甲基纤维素，CM-纤维素）和阴离子交换剂（如二乙氨基乙基纤维素，DEAE纤维素）。当蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质会被吸附在离子交换剂上。之后，通过改变pH或离子强度来洗脱吸附的蛋白质。

盐析是根据蛋白质溶解度的不同进行分离的方法。在盐析过程中，通过加入大量盐（如硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等）来降低蛋白质的溶解度。硫酸铵因其温度系数小、溶解度大（25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升；0度时饱和溶解度为3.9M，即676克/升）以及在这一溶解度范围内许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而被广泛应用。此外，硫酸铵的分段盐析效果也比其他盐更好，且不易引起蛋白质变性。

在进行盐析时，需要考虑的因素包括温度、pH值和蛋白质浓度。温度会影响蛋白质的溶解度，有些蛋白质在低温下溶解度更低；大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度最低；蛋白质浓度高时容易出现共沉现象，因此在盐析前需要稀释血清。

蛋白质盐析常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。硫酸铵在这一溶解度范围内使用广泛，且其温度系数小、溶解度大，分段盐析效果好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间，进行盐析时如需使用其他pH值，可通过添加硫酸或氨水调节。

在使用盐析法分离蛋白质后，需要将蛋白质中的盐除去。通常采用透析法，即将蛋白质溶液装入透析袋内，并用缓冲液进行透析，不断更换缓冲液。透析所需时间较长，因此最好在低温下进行。此外，还可以使用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的方法来快速除盐。

等电点沉淀法是利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点，从而使其沉淀。虽然这种方法很少单独使用，但它可以与盐析法结合使用，以提高蛋白质分离的效率。

低温有机溶剂沉淀法使用可与水混溶的有机溶剂（如甲醇、乙醇或丙酮）来降低蛋白质的溶解度并使其析出。这种方法的分辨力较高，但蛋白质较易变性，因此应在低温下进行。