合聚咖

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简述凝胶双向扩散实验的原理。

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简述凝胶双向扩散实验的原理:利用凝胶的孔隙结构,将待测物质和参比物质分别置于凝胶的两侧,通过扩散作用使两种物质在凝胶中相遇并发生反应,最终形成可见的带状图案,从而实现对待测物质的定性和定量分析。

双向扩散是抗原和抗体溶液相对扩散而形成沉淀线的一种凝胶扩散试验。用于分析溶液中抗原和抗体的纯度,分析不同物质相互间扩原性的关系。是一种免疫扩散技术,借凝胶分隔开的两种反应剂(如抗原和抗体)相向扩散,达到平衡时形成沉淀线。

双向扩散试验:在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散,在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线,根据沉淀线的位置、形状以及对比关系,可对抗原或抗体作出定性分析。双向扩散试验也分为试管法和平板法。

1、试管法:

在含有抗原的溶液和含有抗体琼脂中间,加一层普通琼脂,让下层抗体和上层抗原向中间自由扩散,在抗原、抗体浓度最适时形成沉淀线。

2、平板法:

是在琼脂板上相距3~5mm打一对孔,或者梅花孔、双排孔、三角孔等。在相应孔中加入抗原或抗体,待其自由扩散后,抗原、抗体形成可见的沉淀线。根据沉淀线的位置可作如下分析:

①抗原、抗体是否存在及其相对含量。一般沉淀线靠近抗原孔,提示抗体量大,沉淀线靠近抗体孔,提示抗原量大。

②抗原、抗体相对分子量的分析;抗原或抗体在琼脂内自由扩散,其速度受分子量影响。医学|教育网编辑整理分子量小者,扩散快,反之较慢。由于慢者扩散圈小,局部浓度较大,形成沉淀线弯向分子量大的一方。如若两者分子量相等,则形成直线。