测定病毒空斑形成单位（PFU）用于评估流感病毒滴度和标定感染能力，是本实验的主要目的。

实验需要在符合BSL-2级生物安全标准的实验室中进行，操作H1和H3亚型流感病毒。

实验材料包括胰酶、琼脂、DMEM粉剂、4%多聚甲醛、结晶紫和12孔板等。

实验分为以下几个步骤：

首先，配置琼脂凝胶，现用现配，浓度为1.6~2%，常温保存或高压后常温保存。

配制2×DMEM，溶解于去离子水并加入相应试剂，过滤除菌，4℃保存待用，过滤是为了除菌，确保培养基无菌。

配制胰酶母液，称量50mg胰酶，加入50mL DMEM，配成1mg/mL的母液，过滤后分装，-20℃保存。

固定液可选择性配置，溶解后常温保存，用于后续固定操作。

进行病毒稀释，取6个EP管，用不含血清的DMEM稀释病毒原液，稀释倍数为10-5至10-9。

在12孔板上设置实验组别，从稀释液吸取病毒加入相应孔，每孔1mL。

移除原有含血清培养基，用PBS洗涤一次。

进行病毒攻毒，将无血清病毒稀释液加入孔内，37℃培养箱孵育1-2小时，每15-20分钟轻轻摇匀。

配制琼脂营养覆盖物，使用2×DMEM和胰酶混合物，胰酶终浓度为2μg/mL，每行孔配6ml液体，确保琼脂温度适宜。

移去病毒液，加入琼脂培养基覆盖物每孔1ml，37℃培养48小时。

每孔加入4%多聚甲醛固定液，固定时间至少2小时。

弃去固定液，用水冲洗，使用牙科探针挑出琼脂覆盖物，进行消毒，用水冲洗残余多聚甲醛。

加入结晶紫染色，回收染料以便下次使用。

冲洗干净，用电吹风吹干或晾干，观察并数空斑，计算PFU/mL。

实验流程完整，可用于评估流感病毒滴度和标定感染能力。