分子克隆技术,或基因克隆,是通过在体外对DNA分子进行人工重组,然后将重组分子导入合适受体细胞中,使细胞复制扩增,从而获得多拷贝DNA分子并赋予受体细胞新遗传特征的过程。
具体步骤如下:
1. 目的基因克隆
首先,从特定生物的基因组或cDNA中分离并扩增得到足够量的目的基因或cDNA序列。
2. 载体准备
接着,选择合适的载体,制备足够且纯度较高的载体DNA。
3. 酶切与连接
采用适当策略,将目的基因与载体连接,形成DNA重组分子。
4. 转化/转染/转导
将重组DNA导入大肠杆菌、酵母、植物或动物细胞中。
5. 筛选与鉴定
利用载体选择标记进行筛选,获取含有重组DNA的阳性克隆,或通过再生、移植等手段获得转基因生物。还需对转化细胞、转基因生物进行分子鉴定。
6. 大量培养与表达分析
选择筛选鉴定后的细胞进行大量培养,分离纯化外源基因表达的蛋白质,进行后续结构与功能研究。
版权声明:除非特别标注,否则均为本站原创文章,转载时请以链接形式注明文章出处。