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分子**技术的基本步骤是什么

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分子克隆技术,或基因克隆,是通过在体外对DNA分子进行人工重组,然后将重组分子导入合适受体细胞中,使细胞复制扩增,从而获得多拷贝DNA分子并赋予受体细胞新遗传特征的过程。

具体步骤如下:

1. 目的基因克隆

首先,从特定生物的基因组或cDNA中分离并扩增得到足够量的目的基因或cDNA序列。

2. 载体准备

接着,选择合适的载体,制备足够且纯度较高的载体DNA。

3. 酶切与连接

采用适当策略,将目的基因与载体连接,形成DNA重组分子。

4. 转化/转染/转导

将重组DNA导入大肠杆菌、酵母、植物或动物细胞中。

5. 筛选与鉴定

利用载体选择标记进行筛选,获取含有重组DNA的阳性克隆,或通过再生、移植等手段获得转基因生物。还需对转化细胞、转基因生物进行分子鉴定。

6. 大量培养与表达分析

选择筛选鉴定后的细胞进行大量培养,分离纯化外源基因表达的蛋白质,进行后续结构与功能研究。