EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能快速准确检测细胞DNA复制活性。操作步骤包含以下步骤：首先，取对数生长期细胞接种于96孔板，培养至40%~60%密度，加入腺病毒、转染质粒、miRNA mimic和内参，每处理组至少设置3个生物重复。

接着，在培养基中按1000:1比例稀释EdU溶液，制备50 μmol/L EdU培养基，每孔加入100 μL培养基，根据细胞周期时长，DPCs孵育8小时，HFSCs孵育2~5小时。之后，使用PBS清洗细胞，加入细胞固定液室温孵育30分钟。

然后，每孔加入50 μL 2 mg/mL甘氨酸脱色，5分钟后弃液，加入100 μL PBS清洗，再加入100 μL的0.5% TritonX-100的PBS脱色，最后用PBS清洗一次。

在避光、室温下，加入每孔100 μL的1X Apollo®染色反应液，孵育30分钟后弃液。接着，每孔加入渗透剂清洗，然后加入1X Hoechst33342反应液避光、室温下孵育30分钟，再用PBS清洗。

选择性进行其他染色步骤后，每孔加入100 μL PBS保存待用。建议染色完成后立即观测，或者避光4℃湿润保存，但不超过3天。若为细胞爬片或涂片，使用抗荧光淬灭封片剂封片后4℃保存及检测。

注意，Apollo染料可能造成GFP失活，Apollo染色后无法直接检测GFP。建议使用GFP抗体进行复染以间接检测GFP。