合聚咖

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下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料

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(1)重组质粒上的目的基因若要表达,需要目的基因的首尾含有启动子和终止子.而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间,只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列,并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种内切酶对质粒和目的基因同时切割,便会各自出现相同的粘性末端,便于重组与表达,同时防止自身环化,因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列. (2)①用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒;②导入大肠杆菌体内,目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度,短时间内可获取大量的重组质粒.

(3)重组DNA的两侧分别是启动子和终止子,除BglⅡ外,其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因.

(4)用DNA分子杂交技术检测是否导入目的基因.

(5)资料1显示,甲醇为该酵母菌的唯一碳源,同时诱导HBsAg基因表达.

(6)酵母菌为真核生物,细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器,细菌等原核生物,不具有内质网和高尔基体等细胞器.

故答案为:

(1)SnaBⅠAvrⅡ避免质粒和目的基因自身环化(或任意连接)

(2)DNA连接酶 大量重组质粒

(3)BglⅡ

(4)DNA分子杂交

(5)甲醇

(6)加工(修饰)