OD，即光密度，是测量被检测物吸收光的强度。在微生物学中，OD值常被用来估计微生物的生长情况，通过比浊法间接测定细菌浓度。在一定浓度范围内，菌悬液的透光度与菌体浓度成反比，与OD值成正比。使用分光光度计测定菌液，以OD值表示样品浓度。但在应用此方法时需注意以下几点：

（1）朗伯-比尔定律适用于浓度低于0.01mol/L的稀溶液。高浓度溶液中，吸光粒子间的平均距离减小，受到粒子间电荷分布相互作用的影响，摩尔吸收系数会发生改变，导致偏离比尔定律。因此，测量溶液的浓度应控制在0.01mol/L以下。

（2）不同微生物的细胞大小、表面结构、细胞内物质对光的吸收、反射和折射程度不同，存在最大吸收波长。不同的微生物在不同波长下的光吸收效果不同，最大吸收峰处的测定结果最能体现个体差异。因此，进行该方法时应使用具有扫描功能的分光光度仪确定最大吸收峰。例如，对于大肠杆菌，1 OD600等于约10^8个细胞/ml。但此方法并非适用于所有微生物，需根据实际情况选择合适的波长进行测量。

（3）该方法存在局限性。测量范围受限，当菌悬液浓度超过一定阈值时，测量结果可能产生误差，因此较浓的菌液通常需要稀释后测量。此方法主要适用于细菌和酵母菌悬液，因为它们的菌体较为规则，分布较为均匀，干扰OD测量的因素较少。但对于较大的菌体或丝状菌体，如丝状真菌，分布均匀度及折射反射影响光吸收，可能导致测量结果不准确。此外，若菌液中存在影响光吸收的其他物质，应进行适当处理，如离心后用生理盐水悬浊后进行测定。关于该法的准确性，可以通过绘制标准曲线来验证，标准曲线的横坐标为OD值，纵坐标可选择几个权威的计数指标，如显微镜计数、涂板菌落计数等。更高级的测量方法可以考虑使用流式细胞仪。

综上所述，虽然OD测量法在微生物生长情况的估计中起着重要作用，但其适用范围和局限性需根据具体情况进行调整。测量过程中需注意浓度控制、选择合适的波长、处理可能影响测量的物质，以及验证方法的准确性。最终，是否使用655nm波长进行测量还需根据实际需要和实验条件决定。