实验艺术:在分子层次上揭示生命的秘密,DNA的磷酸基团的负电性使其与苏木精这种碱性染料紧密相合,赋予细胞核深邃的蓝色调,而胞浆则被曙红Y染成鲜明的红色。染料对不同组织成分的亲和力,揭示了组织的结构之美。
必备工具:</从苏木精(160120)的醇溶液,到无水乙醇、硫酸铝、碘酸钠、冰醋酸,每一步都至关重要。更有伊红(160613)等,它们在配制中的精确比例成就了染色的完美呈现。
试剂配制与步骤:</首先,将苏木素(由苏木精、乙醇、硫酸铝、碘酸钠和冰醋酸混合)和伊红(曙红Y与冰醋酸调和)精心调制。操作流程如下:1. 甲醛四重奏</,定格生命的瞬间;2. PBS洗刷</,去除杂质;3. 苏木素入心</,染色细胞核;4. 水洗与分化</,区分内外;5. 伊红上阵</,胞浆显形;6. 洗涤如丝</,清晰呈现;7. 甘油如诗</,保护色彩;8. 脱水透亮</,封存记忆。
对成果的期待是细胞核与胞浆的鲜明对比,如同蓝宝石与红宝石般耀眼。但染色过程并非无瑕,每一步都需要精准的把控。
问题与对策</:1. 白斑</?温度调控或延长处理时间是关键,具体措施请参阅相关指南。
2. 核苍白</?可能是染色时间不够或氧化问题,调整时间并重新染色是良策。
3. 核过染</?时间过长或切片过厚,调整步骤或薄切以优化。
4. 色彩变异</?检查染液是否氧化,及时更换并确保充分蓝化。
5. 伊红失色</?过高的pH值或残留蓝化液需调整,彻底清洗是解药。
6. 细胞质困扰</?适当稀释染液,均匀脱水以解决问题。
7. 蓝黑色沉淀</?金属膜干扰?过滤染液或使用半氧化苏木精,让色彩纯净。
8. 水珠困扰</?确保完全脱水,移除多余的封固剂,再行处理。
9. 难聚焦</?检查封片技术,确保盖玻片的紧密贴合。
10. 回缩的困境</?调整盖玻片的压力,保持稳定的封固状态。
最后的修复艺术</:如果遇到乳白色混浊,更换乙醇,重新脱水是解决方案。核灰蓝的问题,可能需要在冷却凝固后重新包埋,确保固定和脱水过程的准确性。
偶遇挑战</:HE染色不规则可能是设备问题或固定剂进入,尝试用甲苯替换。而强嗜碱性可能是组织处理后的变性,无法逆转。裸核改变则提示切片处理中的细节疏忽,需重新处理并保持湿润。