制作切片的过程包含了取材与固定、脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡染色以及封固等步骤。在取材与固定阶段,从人体或动物的新鲜尸体上取出组织块,将它们放入预配的固定液中,如10%福尔马林或Bouin氏固定液,使蛋白质变性凝固,以防止细胞自溶或细菌分解,保持细胞形态结构。
脱水透明步骤中,利用酒精从低浓度到高浓度进行脱水,随后将组织块置于二甲苯中透明,以去除酒精并替换为二甲苯,才能进行浸蜡包埋。
浸蜡包埋是将透明的组织块浸入石蜡中,使用溶蜡箱保温直至石蜡完全浸入。随后,将已包埋的组织块放入容器中冷却凝固,形成蜡块。切片时,将蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5-8微米厚。切下的薄片需要烫平、贴到载玻片上并烘干。
脱蜡染色采用HE染色,通过使用苏木精和伊红增加组织细胞结构的色彩差异,便于观察。苏木精是一种碱性染料,可使细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色;伊红是一种酸性染料,可使细胞质染成红色或淡红色。在染色前,需要使用二甲苯脱去切片中的石蜡,并依次经过酒精、蒸馏水进行脱水。
脱水透明阶段,染色后的切片经纯酒精脱水,再通过二甲苯使切片透明。封固步骤中,将透明的切片滴上加拿大树胶,并盖上盖玻片封固。待树胶干燥后,贴上标笺,即可完成切片标本的制作。
在甲苯胺蓝液染色方法中,组织切片需先常规脱腊至水,然后在甲苯胺蓝液中染色30分钟,稍作水洗后,入冰醋酸液分化,使胞核和颗粒清晰可见。再次水洗后,用冷风吹干,最后通过二甲苯透明和中性树胶封固。
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