主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。

巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因还有血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热（一般为75~85摄氏度左右）使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。