洗涤主要作用是想去掉多余的未结合的物质，以免对后续的反应产生不良影响。抗原和二抗是一起加到溶液体系中去的，当抗原抗体的比例不是刚好合适的时候，就会出现钩状效应，抗体过量为前钩，抗原过量为后钩，两者均会导致检测结果不准确。两步法，每次只加入一种成分，每次都只加入一种，当孵育完成过后用洗液洗去未结合的物质，以保证不会对下一步的反应产生干扰。

抗体：

抗体（antibody）是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。它（免疫球蛋白不仅仅只是抗体）是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。