葡萄糖有一个醛基，易被氧化成葡萄糖酸。所以如果未被氧化，在极少量氢氧化钠作用下酚酞应显粉红色。如果2.0g中存在一定含量的葡萄糖酸，那么足以中和掉这极少量的氢氧化钠，甚至让溶液呈酸性了，所以酚酞为无色。

另外，使用新沸腾过的冷水的目的是出去水中溶解的氧。