①探究培养液中酵母菌的种群数量变化时，吸取培养液计数前要将试管轻轻振荡几次，目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，减少误差，如果取样前没有将试管振荡，则酵母菌分布不均匀，所以对实验结果影响较大，①错误；

②探究生长素促进生根的最适浓度实验中，需要进行预实验，预实验中需要设置空白对照组，但做正式实验时未设置空白对照，对实验结果基本没有影响，②正确；

③样方法调查蒲公英种群密度时应随机取样，在分布较稀疏地区取样数值会偏小，所以对实验结果影响较大，③错误；

④验证孟德尔分离定律一般用测交的方法，即杂合子与隐性个体杂交，④正确．

故选：B．