小G蛋白的调控途径在细胞信号转导过程中扮演着关键角色，研究其作用机制对免疫药物、原癌基因表达产物和抗病等方面有着重大意义。因此，有效检测小G蛋白活性对于理解细胞信号转导机制至关重要。

小G蛋白是具有与G蛋白相似功能的信号转导蛋白，区别在于其分子量较小，通常在20~30KD。它们作为“分子开关”在细胞信号通路中发挥作用，调控多种生物学过程。小G蛋白的活性状态可通过结合GTP或GDP来判断，结合GTP时为活化状态，可调控下游分子；当GTP水解为GDP时，则恢复到非活化状态。

小G蛋白家族根据序列同源性被分为多个亚家族，如Ras、Rab、Rho、Arf和Ran等，各自在细胞内发挥独特作用。例如，Ras蛋白参与细胞增殖和信号传导，Rho蛋白调控肌动蛋白重组，Rab和Arf蛋白参与细胞膜转运，Ran蛋白调节核孔处蛋白质和RNA分子的运输。

目前，科学家已发现超过100种小G蛋白，它们在多种细胞反应中展现开关作用。为了研究小G蛋白活性，科学家开发了多种检测方法，如Pull-down与G-LISA检测。Pull-down方法通过结合有活性的GTPase，进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测，而G-LISA则是一种改进的ELISA，通过包被效应蛋白的96孔板，快速简便地检测GTPase活化水平，使GTPase定量的准确性增加。

此外，Pull-down检测小G蛋白活性的具体步骤包括构建GST-效应蛋白原核表达载体、GST-效应蛋白的表达与纯化、纯化的GST-效应蛋白与GSH包被的琼脂糖微珠结合、细胞裂解液制备、GST-效应蛋白与GSH-琼脂糖微珠复合物与含有小G蛋白的细胞裂解液孵育、离心获得GST-效应蛋白-GSH-琼脂糖微珠-结合的小G蛋白复合物、洗涤除去未结合的细胞蛋白、将复合物煮沸使其变性，并使蛋白质从珠子中分离出来，最后进行SDS-PAGE电泳及Western blot检测。

G-LISA检测小G蛋白活性的操作步骤包括效应蛋白的受体结合域（RBD）包被于96孔板、将细胞系或原代细胞裂解液、组织裂解液加入96板、孵育后洗去未结合的蛋白、依次加入特异性的一抗和HRP-二抗进行孵育结合，最后利用HRP的水溶性底物或化学发光试剂显色。

这些技术对比显示，虽然Pull-down方法经济实惠，但G-LISA方法则在准确性和简便性上有所提升。