用oligo软件根据你要扩增的基因设计引物:

1.引物长度一般在15到30个碱基，常用的是18-27 bp，但不应大于38。

2.GC含量应该在40%以上，上下游引物的GC含量不能相差太大。

3. 引物所对应模板位置序列的Tm 值在72℃左右可使复性条件最佳。

4.引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行。