生物药表征中的翻译后修饰——脱酰胺反应是一个关键质量属性，影响蛋白质的多种特性。非酶催化过程中，天冬酰胺和谷氨酰胺的脱酰胺反应在体内和体外都会发生，特别是在单克隆抗体中，特定位置的脱酰胺影响着产品的安全性和效力。这一过程涉及Asn通过琥珀酰亚胺中间体的形成和水解，产生多种异构体，如Asp、isoAsp，且受pH、温度、缓冲液和蛋白质结构的影响。

脱酰胺反应在多种疾病中起着重要作用，如衰老和自身免疫性疾病。例如，pH值影响反应速率，碱性条件有利于反应进行；温度升高会加速反应，但缓冲液类型和温度对反应的影响需特别注意。蛋白质的一级结构，尤其是氨基酸残基大小，对脱酰胺敏感性有直接影响。

表征脱酰胺产物的复杂性在于它产生四种异构体，并可能影响蛋白质的电荷异质性和功能。常用的方法包括IEF、CZE、CE、IEX-HPLC和LC-MS/MS等，它们各有优缺点。脱酰胺对抗体稳定性、活性和免疫原性有显著影响，如降低pI、改变电荷分布和影响与抗原的结合。

为了确保药物生产质量，百蓁生物利用高效液相-高分辨质谱联用技术，通过底物上进行的生物药表征，精确检测翻译后修饰如脱酰胺的位置和含量。通过深入理解脱酰胺的机制和影响因素，可以采取策略调控其对活性的影响，确保生物药物的稳定性和有效性。