通常在需要使用斐林试剂时，会直接在实验室调配。它由两个试剂混合制得，分别是斐林试液A和斐林试液B。斐林试液A为蓝色硫酸铜水溶液，斐林试液B为酒石酸钾钠（或称罗谢尔盐）和强碱氢氧化钠的无色透明混合溶液。两种试液配制方法如下：

斐林试液A：由69.28g的五水合硫酸铜溶于1L蒸馏水中得到；

斐林试液B：由346g的四水合酒石酸钾钠和120g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中得到。将以上两试液等体积混合即可得到深蓝色的斐林试剂。