革兰染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。

革兰氏染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色。

可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

革兰染色流程

1、初染剂，使用结晶紫染色。

2、媒染剂，加入复方碘溶液或称革兰氏碘液后会形成不溶性的结晶紫-碘（CV-I）复合体。细菌呈紫黑色。第二步是关键，它的目的是分辨细菌的革兰氏染色特性。

3、脱色剂，使用酒精（95%）脱色，试剂具脂溶剂和蛋白脱水剂之双重功能。此步骤对革兰氏阳性细菌无效，因为细胞壁上厚厚的细胞壁层阻隔了结晶紫-碘复合体的外渗，只能留在细菌体内。革兰氏阴性菌细胞壁层薄，会被脱色而成为无色。

4、复染剂，为了对比，在此之后会加入番红（Safranin）进行复染，革兰氏阴性菌成红色，而革兰氏阳性菌仍保有原来的紫色。