合聚咖

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PCR复性温度如何确定

admin

延伸温度根据你使用的Taq来确定就好了,一般都在70度上下,嫌麻烦就定个70度长期使用。你买的taq的说明书上会给你建议的温度。

退火的温度定在55度就ok了,万年不变也没有关系, 50度到60度都差不多。这个说明书也会给。

变性95度上下几乎万年不变。

最后延伸是为了把没有延伸完的片段(如果有)补全。一般4分钟以上都ok。

非特异性扩增产物看你的引物设计的好不好,设计的好就不太会有。

引物二聚体也是,注意设计的引物的二聚体绝对不能在末端配对成功,这会大大降低引物的效率。

二聚体几乎不可避免,所以PCR完成之后,立刻跑个胶,切胶回收就好了,这样二聚体就不会被回收回来,非特异性产物也会减少很多。