制备琼脂凝胶

注意：一定一定要戴一次性手套！这里推荐咱们家的乳胶手套、丁腈手套。

第一步：用称量纸片（抽屉里）电子天平取0.3g的琼脂粉（以30毫升体系为标准）

第二步：配30ML的1*10的TBST缓冲液与100ml的三角烧瓶里；

第三步：倒入琼脂粉摇匀，并转到微波炉中加热（一般是50S,加锡箔纸封盖）溶解完全

第四步：用手套取出到凉水稍稍晾凉至温热后（约60℃），加入核酸酶（Eb替代物）2ul；要边加边摇匀，使之充分摇匀；

第五步：取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.

注意：梳齿处一定不可以存在气泡！！！！！液面应保持平整无波纹！！！

开始跑胶

第一步：胶凝后取胶放到电泳槽中，倒入电泳液至浸过凝胶

第二步：从冰箱中取出MARK和loading buffer，加入6ULloading buffer到样品中混匀；然后用加样枪分别加到凝胶的大孔中（要缓慢加，不要穿破凝胶，最后枪不要打尽以至于有空气使样品吹打出来）；MARK加到小孔中的任一孔（记住位置）

第三步：盖上电泳槽，加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60-100V，样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动，电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低，当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。

第四步：使用凝胶成像仪拍照，观察条带（mark或样品是否有条带显示）

观察方法：电泳时间依据实验的具体要求而定，在电泳中途可以使用紫外灯直接观察，也可以根据指示剂确定条带的迁移位置，各条区分开后电泳结束，取出凝胶直接检测拍照。

当你拿到你的胶体条带图谱后，找到marker，根据marker就可以确定目标条带啦！